分离柱色谱的分离原理是使用分离的组分在互不相容的固定相和流动相中具有不同的溶解度。
在通过具有流动相的柱移动样品组分的过程中，组分处于两个中。
平衡不断地建立，破坏和重新建立。
固定相中的组分浓度与平衡时的流动相（m）的比率成为分配系数。
因为不同组件的分配系数不相同，所以它们在列中的多个分布之后经历差分分布，并且它们彼此分离。
组件之间的分配系数K的差异越大，分离就越容易。
1.通过将固定剂涂覆在具有一定粒径的载体上形成固定相分配色谱的固定相。
载体（也称为支持物）仅起固定量的固定液的作用。
它必须是惰性材料;它不溶于固定液和流动相，完全不与它们反应，具有大的表面积，并具有良好的机械强度。
常用的载体如硅胶，纤维素，多孔硅藻土和微孔聚乙烯粒料。
分配色谱要求固定剂是样品的良好溶剂，在流动相中不溶或难溶。
常用的固定液有很多种，如水，稀硫酸，甲醇，甲酰胺和一些大分子的有机溶剂，如甲基硅油，聚乙二醇，角鲨烷等。
2.流动相分配色谱中有多种流动相。
水，不同的pH溶液，缓冲溶液和具有不同极性的溶剂可用作流动相。
流动相的要求是：1）与固定剂不混溶，极性差异大; 2）样品组分的溶解度足够大，并且相对小于固定剂对组分的溶解度。
